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Les lettres de résiliation aident à rendre la transition aussi lisse que possible pour l`employé lorsqu`il fournit des renseignements pertinents sur la rémunération, les avantages et les ententes en cours. Terminaison de transcription au gène ADH4 chromosomique. (A) Diagramme de GAL1-ADH4. Les produits d`ACP sont indiqués avec les distances dans les paires de base du centre de chacun au site principal de poly (A) (+ 1). Les flèches vers le haut indiquent les deux sites poly (A). (B) transcription induisible de GAL1-ADH4. La puce pol II de GAL1-ADH4 dans les cellules de type sauvage (DBY548) induite par le galactose pour les temps indiqués. La paire d`amorces ADH4 5 ′ (− 1456 en A) a été utilisée. ENO2 est un contrôle positif, et le télomère VIR (TEL) est un contrôle négatif non transcrit. Les IPs étaient avec le CTD anti-Pan polyclonaux qui détecte le pol II total.

dans Chromatine d`entrée; (C) contrôle IP avec des anticorps non pertinents. (C) terminaison de transcription et phosphorylation CTD SER2. Puce anti-pol II avec CTD anti-Pan comme dans B, et anti-SER2 phosphorylée CTD (S2) dans la souche de type sauvage DBY548. La densité totale de pol II par rapport à la valeur à la position 1 dans l`ORF, normalisée à l`entrée, est indiquée dans le graphique supérieur. Le pol II phosphorylé SER2, normalisé au pol II total, est indiqué dans le graphique inférieur. (D) la terminaison à ADH4 est inhibée par l`inactivation de Rat1. Pol II puce de type sauvage (DBY548, voies 3, 4) et rat1-1 (DBY745, voies 5, 6). Noter la terminaison retardée avec la haute pol II aux positions 3 et 4 de la rat1-1 à 25 ° c (voie 5) par rapport au type sauvage (voie 3). La terminaison en aval du ADH4 a été pratiquement abolie dans le mutant TS rat1-1 à 37 ° c, conformément aux observations antérieures montrant que cette exonucléase et son homologue humain, hXrn2, sont des facteurs de terminaison essentiels (Kim et al., 2004b; Ouest et al. 2004).

Le modèle de torpille suggère que lorsque Rat1 est inactivé, le défaut de terminaison est causé par un défaut de dégradation de l`ARN naissant en aval du site de clivage poly (A). Nous avons testé la prédiction selon laquelle l`inactivation de l`Rat1-1 stabiliserait les transcriptions naissantes qui coimmunopprécipité avec Pol II dans la région de 3 ′-flanking. Dans la rat1-1 à 37 ° c, les polymérases qui n`avaient pas été interromp étaient abondantes dans la région des 3 ′-flanking, mais il y avait peu ou pas d`ARN naissant qui leur était associé (Fig. (Fig. 6B). 6B). Un manque d`ARN naissant pourrait être dû à la libération de la transcription de l`ARN sans libération de polymérase du modèle; Cependant, cela est peu probable parce que l`hybride ARN – ADN est nécessaire pour une association stable de la polymérase avec l`ADN (Kireeva et al. 2000).

L`ARN naissant en aval du site poly (A) a été considérablement stabilisé par la perte de Xrn1 et de Rat1 chez le rat 1-1, le double mutant Δxrn1 à 37 ° c, mais pas lorsqu`un seul a été inactivé (Fig. (Fig. 6B). 6B). Un rôle pour Xrn1, qui est principalement cytoplasmique, dans la dégradation des transcriptions de pol II naissante est inattendu, mais en accord avec le fait que cette exonucléase fonctionne dans le noyau dans le traitement de l`ARNr et du snoRNA (Petfalski et al. 1998; Xue et coll. 2000; Fang et al. 2005). Alors que Xrn1 participe à la dégradation de l`ARN naissant, sa suppression n`a pas d`effet détectable sur la terminaison (Fig. (Fig. 6C; 6C; Supplémentaire Fig.

2A). Bien qu`il ait complété la croissance de TS et localisé au gène ADH4, NLS-Xrn1 n`a pas réussi à corriger le défaut de terminaison dans rat1-1 (Fig. (Fig. 2B, 2B, voies 17, 18). En revanche, le défaut de terminaison chez le rat 1-1, Δxrn1 à 37 ° c a été entièrement corrigé par un plasmide RAT1 à copie unique (données non illustrées). Nos résultats n`ont donc pas confirmé l`hypothèse que le défaut de terminaison dans rat1-1 est nécessairement corrélé avec la stabilisation de l`ARN associé aux polymérases en aval du site poly (A).